ABSTRACT
A soluble factor which augments the expression of major histocompatibility complex class I (MHC I) antigens on a number of murine tumor cell lines, has been isolated from the culture supernatants of mixed lymphocyte reaction of spleen cells derived from C57B1/6, Balb/c and Swiss mice. The factor, termed MHC-augmenting factor (MHC-AF) has been partially purified by Sephadex G-100 column chromatography and reverse phase HPLC. MHC-AF activity is associated with an 18 kDa molecule. MHC-AF activity was resistant to pH 2.0 treatment and partially purified MHC-AF preparations did not have any activity in L929 cell/vesicular stomatitis virus (VSV) interferon bioassay system. Antibodies to IFN-gamma did not block the activity of MHC-AF. These results indicate that a MHC-AF distinct from IFN-gamma, is produced by mouse spleen cells undergoing a mixed lymphocyte reaction.
Subject(s)
Mice , Animals , Antibodies/pharmacology , Chymotrypsin/metabolism , Chymotrypsin/chemistry , Comparative Study , Concanavalin A/pharmacology , Hot Temperature , Histocompatibility Antigens Class I/metabolism , Histocompatibility Antigens Class I/drug effects , Interferon-gamma/pharmacology , Interferon-gamma/metabolism , Interferon-gamma/immunology , Lymphocytes/physiology , Mice, Inbred BALB C , Mice, Inbred C57BL , Proteins/pharmacology , Proteins/metabolism , Proteins/isolation & purification , Spleen/cytology , Trypsin/metabolism , Trypsin/chemistry , Tumor Cells, Cultured/immunology , Tumor Cells, Cultured/drug effectsABSTRACT
In the present study, some antitumor mechanisms of Eubacterium lentum (TYH-11) and bacterial components having antitumor effects were investigated. E.lentum induced maximum NK cell activity in C3H/He mice on day 1 after injection (90.6% against 33.9% of control at E:T ratio 50:1) and the activity was kept at a level of 48.6% on day 7. Tumoricidal peritoneal macrophages were induced 9 days after E.lentum injection into BALB/c mice (56.2% against 10.1% control at E:T ratio 10:1). Tumoricidal macrophage activity persisted at the same level for at least 11 days. Cytotoxic T lymphocyte (CTL) activity was induced only in tumor bearing mice treated with E.lentum, 4 weeks after tumor inoculation. Antitumor activity was observed in the cell wall (CW) and membrane fractions (CM) of E.lentum. CW induced NK cell activity; the activity was transient while the kinetics of NK activity by CM showed 2 peaks, on day 1 and day 7. Tumoricidal macrophages were induced by CW and the activity level was the same as that induced by whole body, while that induced by CM was at a lower level. Neither CW nor CM induced CTL in tumor bearing mice.
Subject(s)
Adjuvants, Immunologic/pharmacology , Animals , Antineoplastic Agents , Cytotoxicity, Immunologic , Eubacterium/immunology , Killer Cells, Natural/immunology , Macrophages, Peritoneal/immunology , Male , Mice , Serial Passage , Tumor Cells, Cultured/immunologyABSTRACT
Se efectuó un estudio comparativo de los receptores para la variante RD del virus coxsacki B3 presentes en la membrana plamática de eritrocitos humanos y de células de rhabdomiosarcoma (RD). Para ello se usó un anticuerpo monoclonal, obtenido a partir del receptor presente en la célula RD, el cual fue marcado con 125l. El ligando marcado se unió a los receptores de los eritrocitos humanos e impidió que el virus se uniera a ellos. El anticuerpo monoclonal saturó los receptores, lo que permitió calcular el número de sitios de unión, que fue de 1.95x10 3 por eritrocito, número aproximadamente 10 veces menor que los calculados para las células RD. Los receptores de ambas células fueron bloqueados en su unión al ligando, cuando dos proteasas usadas, la quimotripsina y la pronasa, ejercieron su acción proteolítica, modificando la estructura de los receptores. Los presentes en la membrana plasmática de las células RD fueron más sensibles a la acción proteolítica que los presentes en los eritrocitos. Otra proteasa usada, la tripsina, bloqueó los receptores sobre los eritrocitos en un porcentaje similar a como lo hicieron las otras dos enzimas. Por el contrario, los receptores presentes en las células RD fueron casi insensibles al tratamiento con la tripsina.Las glicoforinas A, tipos MN y MM, fueron capaces de competir por ambos receptores, no así la tipo NN. Se concluye de esto que los receptores presentes en la membrana plasmática de los eritrocitos humanos y de las células RD, son de naturaleza proteica y comparten epítopes. El receptor presente en los eritrocitos humanos para el virus coxsackie B3, variante RD, que es bloqueado por el anticuerpo monoclonal, podría ser la glicoforina A, tipo MN y/o MM
Subject(s)
Humans , Mice , Enterovirus B, Human/immunology , In Vitro Techniques , Receptors, Virus/analysis , Tumor Cells, Cultured/immunology , Antibodies, Monoclonal , Chymotrypsin , Enterovirus B, Human/classification , Erythrocytes/immunology , Glycophorins/immunology , HeLa Cells , Endopeptidases , Pronase , Receptors, Virus/drug effects , Receptors, Virus/immunology , Rhabdomyosarcoma/immunology , Trypsin , Tumor Cells, Cultured/drug effectsABSTRACT
Quantitation of major histocompatibility complex (MHC) antigens on cells can accurately be done by using a flowcytometer. Since flowcytometer is not freely accessable an alternate, simple method for relative quantitation of MHC antigens has been devised. In this procedure, YAC lymphoma cells were first treated with a monoclonal anticlass I MHC antibody and then with a rabbit anti mouse Ig-antibody coupled to peroxidase, followed by colour development using a substrate of peroxidase enzyme. Various assay parameters have been optimized. The validity of the procedure was examined by assessing the enhanced MHC expression on YAC cells treated with a soluble rat spleen derived factor, by the new procedure as well as by the flowcytometer. Comparable results were obtained by using both techniques.
Subject(s)
Animals , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Flow Cytometry , Histocompatibility Antigens Class I/analysis , Tumor Cells, Cultured/immunologyABSTRACT
La técnica de hibridomas, desarrollada por Kohler y Milstein, permite la obtención de anticuerpos de especificidad única (p.e. anticuerpos monoclonales). Esta metododlogía fue introducida en el Laboratorio de Immunología del Departamento de Microbiología de la Escuela de Medicina, Recinto de Ciencias Médicas, UPR en 1986. La producción de anticuerpos monoclonales contra Sp2/0-Ag 14 que aquí se reporta, describe la metodología utilizada y es de importancia porque constituye el primer trabajo sobre anticuerpos monoclonales realizado en el Recinto de Ciencias Médicas y en Puerto Rico
Subject(s)
Rats , Animals , Antibodies, Monoclonal/biosynthesis , Antigens, Neoplasm/immunology , Antigens, Surface/immunology , Hybridomas/immunology , Enzyme-Linked Immunosorbent Assay , Tumor Cells, Cultured/immunologyABSTRACT
La reactividad de siete anticuerpos monoclonales contra antígenos de superficie de las células de mieloma Sp2/O-Ag14 fue analizada simultáneamente por microscopía de fluorescencia y por citometría de flujo. Se incubaron 1 x 10**6 células de Sp2/O-Ag14 con 200 micronl de anticuerpo monoclonal a 4-C por 30 min. Luego de lavar 2 veces con PBS las células fueron incubadas a 4-C por 30 minutos con una dilución 1:400 de anticuerpos de carnero anti-immunoglobulinas de ratón, conjugados a isotiocianato de fluoresceína. Luego de lavar tres veces con PBS, las células se utilizaron para el análisis. Por microscoía de fluorescencia se detectaron diferentes patrones de reactividad con los anticuerpos monoclonales. Estos patrones fueron denominados: homogéneo anular, parchos anulares, parchos putiformes, difuso y homogéneo. Estos patrones podrían representar diferentes espítopes reconocidos monoclonales contra los antígenos de superficie de Sp2/O-Ag14 varió entre un 79 a un 90% al analizarse por cimetría de flujo con el sistema EPICS V. Al compararla con la microscopía de fluorescencia, la citometria de flujo determinó de una forma mas rápida, sensitiva y cuantitativa la reactividad de los diferentes anticuerpos monoclonales contra antígenos de superficie de las células Sp2/O-Ag14